Dvouletá rostlina je kvetoucí rostlina, jejíž životní cyklus trvá dva roky. V prvním roce rostlina vyrůstá z listů, stonků a kořenů (vegetativních struktur), poté v chladných měsících přechází do období klidu. Obvykle zůstává stonek velmi krátký a listy jsou nízko u země a tvoří růžici. Mnohé dvouletky vyžadují chladovou kúru, než vykvetou. Následující jaro/léto se stonek dvouleté rostliny výrazně prodlouží. Rostlina pak kvete, vytváří plody a semena, než nakonec odumře. Dvouletých rostlin je mnohem méně než trvalek nebo letniček.
Za extrémních klimatických podmínek může dvouletá rostlina dokončit svůj životní cyklus za velmi krátkou dobu (např. 3 nebo 4 měsíce místo 2 let). To je poměrně běžné u sazenic zeleniny nebo květin, které byly vystaveny chladným podmínkám, než byly zasazeny do země. Toto chování vede k tomu, že mnoho normálně dvouletých rostlin je v některých oblastech považováno za jednoleté. Kvetení lze u některých dvouletých rostlin vyvolat aplikací rostlinného hormonu giberelinu, ale komerčně se to provádí jen zřídka.
Z pohledu zahrádkáře se status rostliny jako jednoleté, dvouleté nebo vytrvalé často liší podle místa nebo účelu. Dvouleté rostliny pěstované pro květy, plody nebo semena musí být pěstovány po dobu dvou let. Dvouletky, které se pěstují pro jedlé listy nebo kořeny, se pěstují jako jednoletky, např. řepa, růžičková kapusta, zelí, mrkev, celer, petržel a švýcarský mangold. Pokud je normálně dvouletá rostlina pěstována v extrémně drsných podmínkách, bude pravděpodobně považována za jednoletou, protože nepřežije zimní chlad. Naopak jednoletá rostlina pěstovaná v extrémně příznivých podmínkách může mít velmi úspěšné množení semeny, což jí dává zdání dvouletky nebo trvalky. Některé krátkověké trvalky se mohou jevit spíše jako dvouleté než vytrvalé. Pravé dvouletky kvetou pouze jednou, zatímco mnoho trvalek kvete každý rok, jakmile dospějí.
Příkladem dvouletých rostlin jsou petržel, měsíčnice, řepa stříbrná, vilém sladký, kokoška pastuší tobolka a mrkev. Maceška je dvouletka, která se často pěstuje jako jednoletka. Šlechtitelé vyšlechtili jednoleté kultivary několika dvouletých rostlin, které vykvetou hned první rok ze semen, např. náprstník, stock a cesmína.
Dvouleté rostliny se mohou udržet při životě déle než dva roky za podmínek prostředí, které jim brání v kvetení. Dvouleté cukrové řepě bylo zabráněno v kvetení tím, že nebyla ošetřena chladem potřebným pro kvetení. Ve skleníku byla udržována při životě 41 měsíců.
